摘要：新城疫是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病,具有很高的發病率和病死率,對養禽業危害極大。為了探討新城疫病毒融合蛋白(Fusion protein,F)胞內尾部(Cytoplasmic tail,CT)后段的氨基酸(Amino acid,aa)在細胞融合中的作用,定位該區域影響F蛋白功能的關鍵氨基酸,本研究利用基因定點突變和體內同源重組技術構建7個突變體,經BHK-21細胞表達后,分別用間接免疫熒光法和流式細胞術定性和定量檢測各突變體蛋白的表達效率,采用R18染料轉移實驗、指示基因法、吉姆薩染色對各突變體蛋白促細胞融合的三個階段分別進行分析,并利用Western Blot檢測突變體功能的改變是否與F蛋白的裂解活化有關。結果顯示,與野生型F蛋白相比,突變體N542A、L544A、M547A的半融合活性均發生了顯著變化,分別為野生型的189.8%、58.5%和17.3%,而突變體G540A、N541A、G545A、Q546A的半融合活性處于野生型的80.1%~117.5%之間(P均大于0.05)。突變體N542A、L544A、M547A的內容物混合能力分別為野生型的248.5%、62.2%和12.6%,其它突變體的內容物混合能力處于野生型F蛋白的95.8%~119.9%之間(P均大于0.05)。突變體L544A和M547A形成合胞體的大小與數目均有下降,其中M547A幾乎喪失了形成合胞體的能力,突變體N542A形成的合胞體的能力則大幅上升。除了M547A的表達水平有所降低之外(為野生型的66.3%),其它各突變體F蛋白在細胞表面的表達水平均處于野生型F蛋白的91.3%~111.4%之間(P均大于0.05)。由此可見,NDV F蛋白胞內尾部N542、L544和M547為關鍵氨基酸,對F蛋白的融合活性起到了重要作用。