摘要：Cas9核酸酶在CRISPR/Cas9系統中執行切割靶標脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)的重要功能,研究其在體內的代謝行為對活體水平的基因編輯具有重要的指導意義。本工作采用N-羥基琥珀酰亞胺酯鍵將近紅外熒光染料Vivo TagS750與Cas9蛋白偶聯,制備了標記率高達99%的TagS750-Cas9融合蛋白。采用熒光強度監測以及瓊脂糖凝膠電泳的方法對Cas9蛋白在常見生理緩沖溶液中的穩定性及切割活性進行了鑒定,并將其尾靜脈注射到BALB/c小鼠體內,通過監測TagS750-Cas9蛋白熒光強度的變化對其在體內的代謝和分布進行了研究。結果表明:TagS750-Cas9蛋白的體外穩定性良好,表面標記的TagS750并不影響Cas9蛋白的切割活性。TagS750-Cas9蛋白進入體內后,平均血漿消除半衰期(t1/2β)為55 h;主要分布于肝、腎、肺、脾臟中,心臟的分布較少;72 h可被機體完全代謝清除。研究結果為CRISPR/Cas9系統中Cas9核酸酶的體內應用奠定了基礎。