摘要：目的原核表達枯草芽孢桿菌Expansin蛋白,并分析其促進多糖糖化的活性。方法以過夜培養的Bacillus subtilis subsp. Subtilis subtilis str. 168基因組為模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin,構建重組質粒6his-expansin-6his-p ET28a(+)[heh-pET28a(+)],轉化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導表達融合蛋白6His-Expansin-6His(HEH);并對表達條件進行優化。產物經Ni-NTA純化,檢測其與多糖降解酶(polysaccharide degrading enzyme,PDE)(纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶)及多糖復合酶(polysaccharide complex enzyme,PCE)制劑的協同活性(synergistic activity,SA)。結果經雙酶切鑒定,重組質粒heh-p ET28a(+)構建正確;融合蛋白HEH在0. 05 mmol/L IPTG 30℃誘導30 h的最適表達條件下,表達量約為1. 2 mg/m L,其相對分子質量為26 400,目的蛋白純度達95%;該蛋白與纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶的SA分別為171. 53%、61. 95%、230. 00%,與PCE降解濾紙(filter paper)、秸稈(rice straw)的SA分別為312. 83%、356. 59%。結論重組的融合蛋白HEH與PDE均具有較高的協同作用,為Expansin在生物質木質纖維素糖化領域的應用奠定了基礎。