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低密度cDNAMacroarray對干擾素α抗病毒蛋白的篩選

摘要:目的 基于低密度cDNAMacroarray技術篩選出差異表達的干擾素(IFN)僅抗病毒基因,以探討IFNα抗病毒蛋白的表達與HBV復制的關系。方法以一定濃度的IFNa處理肝胚瘤細胞株HepG2和HepG2.2.15細胞6h,用cDNAMacroarray分析比較兩細胞株IFN僅抗病毒基因表達譜,并篩選出差異表達的IFNa抗病毒基因。將表達HBV核心蛋白(HBc)的質粒DHBc-EGFP轉染HepG2細胞,RT-PCR法分析HBc對IFN僅抗病毒基因表達的影響。將表達抗黏病毒A蛋白(MxA)的表達質粒pcDNA3.1Flag-MxA轉染HepG2.2.15,以酶聯免疫吸附試驗、Dotblot、Southernblot等方法分別檢測HepG2.2.15細胞表達釋放的HBsAg與HBeAg、細胞外HBVDNA和細胞內HBVDNA復制中間體(松弛環狀DNA、雙股線性DNA),以判斷HBV復制情況。兩組間數據比較采用t檢驗,組間不同時間點數據比較采用單因素方差分析。結果cDNAMacroarray分析顯示HepG2和HepG2.2.15細胞的抗病毒基因表達譜具有差異性:IFNa抗病毒基因中干擾素誘導跨膜蛋白(IFITM)1、IFITM2、IFITM3、RING4等在HepG2.2.15細胞的表達被部分抑制,而重要的抗病毒蛋白MxA表達被完全抑制。HBc轉染組細胞中MxAmRNA表達的相對水平為0.31±0.05,低于空白對照組的0.74±0.04,差異有統計學意義,P〈0.05。MxA蛋白轉染HepG2.2.15細胞48、72h后,MxA轉染組細胞上清液中HBsAg的S/CO值分別為1.42±0.21和1.58±0.18,HBeAg的s/co值為1.44±0.14和2.28±0.24,而空白對照組細胞上清液中HBsAg的S/CO值為1.92±0.19和2.79±0.25,HBeAg的S/CO值為2.31±0.46和3.37±0.29,兩組細胞上清液中HBV抗原的s/CO值差異均有統計學意義,P值均〈0.05。細胞外HBVDNA、胞內HBV復制中間體DNA均無明顯變化。結論HBV及其抗原成分的復制和表達影響著IFNa抗病毒蛋白的表達;HBV通過抑制IFNd抗病毒蛋白的表達而發揮拮抗IFNa的抗病毒活

關鍵詞:
  • 肝炎病毒  
  • 乙型  
  • 干擾素  
  • 抗病毒蛋白  
  • cdna  
  • macroarray  
作者:
管世鶴 楊凱 王琴 程中樂 潘穎 吳園園 楊東亮
單位:
安徽醫科大學第二附屬醫院檢驗科 合肥230601 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院臨床免疫研究室
刊名:
中華肝臟病

注:因版權方要求,不能公開全文,如需全文,請咨詢雜志社

期刊名稱:中華肝臟病

中華肝臟病雜志緊跟學術前沿,緊貼讀者,國內刊號為:50-1113/R。堅持指導性與實用性相結合的原則,創辦于1993年,雜志在全國同類期刊中發行數量名列前茅。

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